试剂triton中文
大家好,今天我想和大家详细讲解一下关于“试剂triton中文”的知识。为了让大家更好地理解这个问题,我将相关资料进行了分类,现在就让我们一起来学习吧。
1.在病毒提取过程中,加入triton-x100,巯基乙醇,和EDTA作用是什么?
2.乙酸乙酯能在水溶液中萃取tritonx-114,使蛋白留在水溶液中么
3.核酸提取试剂中的洗脱液的作用
4.チオシアン酸カリウム中文翻译
在病毒提取过程中,加入triton-x100,巯基乙醇,和EDTA作用是什么?
Triton X100一般在阻断缓冲液中或稀释缓冲液中使用,由于存在疏水结构域,整合蛋白和膜的结合非常紧密,用此试剂可才能从膜上洗涤下来.
巯基乙醇的作用可能有催化蛋白质完全变性和解聚,解离成亚基或单个肽链.
EDTA能与Al3+、Fe3+、Ti4+、Mn2+、Cu2+、Pb2+、Zn2+、Ni2+、Co2+等离定量作用.
具体对病毒提取有什么作用~我也不是很清楚~你自已再想想吧!我只知道这些药品的理论.
乙酸乙酯能在水溶液中萃取tritonx-114,使蛋白留在水溶液中么
中文如下:
RevertAid?第一链cDNA合成试剂盒
(#K1621 10次)
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分析许可证
警示
推荐第一链cDNA合成在RNAase污染被清除的条件下操作。移液器枪头和试管必须用0.1%的DEPC处理(0.1%水溶液浸泡过夜,100℃加热30min,高压灭菌)。强烈推荐戴手套。
重要!
-20℃保存。
(如果长期保存对照RNA置-70℃)。
对照RNA避免反复冻融。对照RNA融化后冰上操作。
Lot.:1210
保质期见包装标签.
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试剂盒设计用来从RNA模板制备全长第一链cDNA。RevertAid?第一链cDNA合成试剂盒依赖于一种遗传工程产品:低RNA酶H活性的Moloney鼠白血病病毒逆转录酶(RevertAid? M-MuLV RT)。这就允许从长模板(最大13 kb)合成全长cDNA。RevertAid? M-MuLV RT合成第一链cDNA的位置由不同引物决定:
随机六聚物引物:在RNA模板上非特异的位置,总RNA中所有RNA都是cDNA合成的模板。 oligo(dT)18:在poly(A)+ mRNA 的3’-末端。这种情况下,只有带3’-poly(A)尾的mRNA是cDNA合成的模板。 序列特异性引物:在引物结合位置。用这个系统合成的第一链cDNA可用做PCR*模板。因为cDNA合成和PCR的反应条件是一致的,所以cDNA反应混合物可直接加入PCR混合物。 合成的第一链cDNA也可用做第二链合成的模板。放射标记的DNA 可用做杂交探针。
带3’-poly(A)尾的1.1 kb RNA 作为对照。
*PCR过程为Hoffmann-La Roche, Inc.的专利涵盖。
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试剂盒内容
1. RevertAid? M-MuLV逆转录酶 (200u*/?l):
15?l酶溶解在贮存缓冲液中:50mM Tris-HCl (pH 8.3), 0.1M NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 0.1% Triton? X-100和50%甘油。
2. RiboLock? 核糖核酸酶抑制剂(20u**/?l):
15?l酶溶解在贮存缓冲液中:20mM HEPES-NaOH (pH 7.5), 50mM NaCl, 8mM DTT, 0.5mM ELUGENT?洗涤剂和50%甘油。
3. 5x反应缓冲液:
100?l 5x反应缓冲液:250mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25°C), 250mM KCl, 20mM MgCl2, 50mM DTT.
4. 10mM dNTP混合物:
30?l 10mM dGTP、dATP、dTTP、dCTP水溶液。
5. Oligo(dT)18引物:
15?l 0.5?g/?l (15A260 units/ml) 水溶液。
6. 随机六聚物引物:
15?l 0.2?g/?l (6A260 units/ml) 水溶液。
7. 对照引物:
15?l 10pmol/?l (1.7A260 units/ml) 17-mer水溶液。
8. 对照RNA:
15?l 1.1 kb带3’-poly(A)尾的1.1 kb RNA ,0.5?g/?l。
9. DEPC处理过的水:
2 x 1.5ml 水在deionized on a Milli-Q?装置中去离子,DEPC处理。
* 一个单位 RevertAid? M-MuLV RT:37°C 10min内将 1 nmole dTMP结合到一个多核苷酸片段上(DE-81中吸附)。
**一个单位 RiboLock?核糖核酸酶抑制剂:抑制5ng RNase A 50%的活性。
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操作过程
1. 合成适合PCR 扩增的第一链cDNA
① 冰上在一个管子中制备如下反应混合物:
模板RNA*:
总RNA 0.1-5μg
或poly(A)+ RNA 10ng- 0.5μg
或特异RNA 0.01pg - 0.5μg
引物:
oligo(dT)18引物(0.5μg/μl) 1μl
或随机六聚物引物(0.2μg/μl) 1μl
或序列特异性引物 15–20pmol
DEPC处理过的水 to 12μl
轻柔混合,微量离心机离心3-5秒。
② 70°C孵育混合物5min,冰冷却,短暂离心,收集沉淀。
③ 管子置于冰上,按指定顺序加入以下成份:
5x 反应缓冲液 4μl
RiboLock?核糖核酸酶抑制剂(20u/μl) 1μl
10mM dNTP混合物 2μl
轻柔混合,短暂离心,收集沉淀。
④ 37°C孵育5min(随机六聚物引物25°C 5min)。
*反应所需的总RNA或poly(A)+ RNA的量决定于基因的表达水平。
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⑤ 加入RevertAid? M-MuLV 逆转录酶 (200u/μl) 1μl。
终体积20μl。
⑥ 42°C孵育混合物60min (随机六聚物引物25°C孵育10min,最后42°C 60min)。
⑦ 70°C 加热10min终止反应。冰冷却。
合成的第一链cDNA可直接用于PCR扩增。PCR 可用以下产品来完成:
Taq DNA聚合酶(推荐)(#EP0401, #EP0402, #EP0403, #EP0404);
Taq DNA聚合酶(天然的,没有BSA)(#EP0281, #EP0282, #EP0283, #EP0284);
Taq DNA聚合酶(天然的,没有BSA)(#EP0071, #EP0072);
2mM dNTP 混合物(#R0241, #R0242);
10mM dNTP 混合物(#R0191, #R0192)。
注意:
1. 先从总RNA 中分离poly(A)+ RNA并不是一定需要的,但这样做可以改善终产物的收获率和纯度。
2. RNA 样品不能被基因组DNA污染。
3. oligo(dT)18引物不需要优化条件,而以反应中合成的cDNA平均长度来看,随机六聚物引物与RNA的比例是严格的。增加hexamer/RNA比例将导致更短的(~500 bp) cDNA更高的得率,反之降低这个比例将产生更长的产物。
4. 增加反应温度到45°C可减轻富含GC mRNA的二级结构问题。
5. 分析反应产物(see chapter 4) cDNA 需要[32P]放射标记。为此加入RevertAid? M-MuLV RT前加入10μCi[?-32P]dNTP (e.g., dATP) 到反应混合物中。加入1μl 0.5M EDTA 终止反应,置于冰上。
6. 合成的cDNA应该-20°C保存。
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2.合成适合第二链合成的第一链cDNA
① 冰上在一个管子中制备如下反应混合物:
模板RNA*:
poly(A)+ RNA 1μg
或特异RNA 0.5 - 1μg
引物:
oligo(dT)18引物(0.5μg/μl) 1μl
或随机六聚物引物(0.2μg/μl) 1μl
或序列特异性引物 100pmol
DEPC处理过的水 to 12μl
轻柔混合,微量离心机离心3-5秒。
② 70°C孵育混合物5min,冰冷却,短暂离心,收集沉淀。
③ 管子置于冰上,按指定顺序加入以下成份:
5x 反应缓冲液 4μl
RiboLock?核糖核酸酶抑制剂(20u/μl) 1μl
10mM dNTP混合物 2μl
轻柔混合,短暂离心,收集沉淀。
④ 37°C孵育5min(随机六聚物引物25°C 5min)。
⑤ 加入RevertAid? M-MuLV 逆转录酶 (200u/μl) 1μl。
终体积20μl。
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⑥ 42°C孵育混合物60min (随机六聚物引物25°C孵育10min,最后42°C 60min)。
⑦ 70°C 加热10min终止反应。冰冷却。
合成的第一链cDNA可用于第二链合成。合成可用以下产品来完成:
DNA聚合酶I (#EP0041, #EP0042);
T4 DNA连结酶(#EL0014, #EL0011, #EL0012);
核糖核酸酶H (#EN0201, #EN0202);
核酸酶S1 (#EN0321).
Notes
1. 为了增加合成的特异性和效率必须从总细胞RNA中分离poly(A)+ 片段。
2. oligo(dT)18引物不需要优化条件,而以反应中合成的cDNA平均长度来看,随机六聚物引物与RNA的比例是严格的。增加hexamer/RNA比例将导致更短的(~500 bp) cDNA更高的得率,反之降低这个比例将产生更长的产物。
3. 增加反应温度到45°C可减轻富含GC mRNA的二级结构问题。
4. 分析反应产物(see chapter 4) cDNA 需要[32P]放射标记。为此加入RevertAid? M-MuLV RT前加入10μCi[?-32P]dNTP (e.g., dATP) 到反应混合物中。加入1μl 0.5M EDTA 终止反应,置于冰上。
5. 合成的cDNA应该-20°C保存。.
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3. 合成高比放射性的第一链
① 冰上在一个管子中制备如下反应混合物:
模板RNA*:
poly(A)+ RNA 0.5μg
引物:
oligo(dT)18引物(0.5μg/μl) 1μl
或随机六聚物引物(0.2μg/μl) 1.5μl
或序列特异性引物 100pmol
DEPC处理过的水 to 8μl
轻柔混合,微量离心机离心3-5秒。
② 70°C孵育混合物5min,冰冷却,短暂离心,收集沉淀。
③ 管子置于冰上,按指定顺序加入以下成份:
5x 反应缓冲液 4μl
RiboLock?核糖核酸酶抑制剂(20u/μl) 1μl
10mM dGTP, dCTP, dTTP混合物 1μl
0.1mM dATP* 4μl
轻柔混合,短暂离心,收集沉淀。
④ 37°C孵育5min(随机六聚物引物25°C 5min)。
⑤ 加入:
[?-32P]dATP (10mCi/ml) 1μl
RevertAid? M-MuLV 逆转录酶 (200u/μl) 1μl
终体积20μl。
* 个别的dNTP溶液不包括在这个试剂盒内。使用dNTP Set (#R0181)进行合成。.
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⑥ 42°C孵育混合物60min (随机六聚物引物25°C孵育10min,最后42°C 60min)。
⑦ 加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
⑧ 如果需要,加入等体积(25μl)0.6N NaOH水解RNA,70°C孵育30min。
⑨ 在Sephadex? G-50柱上层析法移除未结合dNTPs。
用这种方法获得的高特异活性第一链cDNA (>107 dpm/μg)可用做Southern中的杂交探针。
注意:
为了获得更高特异活性 (over 108dpm/μg) 的cDNA,加入100μCi of [?-32P]dATP到反应混合物中。如果最终的反应体系大于20μl,在分离管中真空蒸发10μl [?-32P]dATP (10mCi/ml)并转移制备的反应混合物到这个管子中 (5 step)。然后继续合成。
4. 分析第一链cDNA产物
仅放射标记的cDNA产物可以用碱性琼脂糖凝胶电泳鉴定或分析。
测定第一链cDNA的得率
① 点1μl样品到两张DE-81滤膜(1.5x1.5cm)。
② 烤灯烤干滤膜。保留一张滤膜,直接用于测定样品总放射活性。
③ 另一张滤膜在10ml 7.5% (w/v)Na2HPO4 x12H2O中洗涤三次5min;水漂洗,丙酮或96%乙醇洗。
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④ 烤灯烤干洗过的滤膜。
⑤ 转移两张滤膜(未洗和已洗的)到放射活性计数器内并计数。
⑥ 用以下公式计算第一链cDNA得率:
如果dNTP终浓度是1.0mM,那么测定(20μl)中mol dATP是2x10-8 mol。标记的dATP数量是相当低的,所以可忽略。然而,在高特异活性的cDNA时(chapter 3),未标记dATP的终浓度是0.02mM。为了测量中mol dATP的计算,需要总计未标记和标记的摩尔数。
MW 是核酸的平均分子量,等于333x106 μg/mol。因为所有四种dNTP都参加反应,所以MW 乘了4。
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例如:For example:
如果水洗滤膜产生4x104dpm,未水洗滤膜产生1.8x106dpm;
那么:
cDNA yield (μg) = 4x104dpm x (2x10-8mol dATP) x 4 x (333x106μg/mol) = 0.59μg
1.8x106dpm
cDNA yield % = 0.59μg x 100% = 59%
1μg
碱性琼脂糖凝胶电泳分析
标记[32P] 的第一链cDNA合成产物可以用碱性琼脂糖凝胶电泳分析。同样,合成产物和所用的DNA marker 都要[32P]标记。
① 制备1.4% 琼脂糖凝胶(30mM NaCl, 2mM EDTA),在碱性电泳缓冲液(30mM NaOH, 2mM EDTA)平衡至少1h。
② 标本抽样(1x105 dpm),转移到一个单独的管子中,5μl水稀释。加入5μl 2x loading buffer
(60mM NaOH, 2mM EDTA, 6% Ficoll? 400, 0.05% bromophenol blue)。标记的DNA marker应该用同样的2xloading buffer稀释。
注意. 2x loading buffer应该保存在-20°C,或染料应该使用前才加。
③ 加入样品,在碱性琼脂糖凝胶中5V/cm电泳,到染料泳动到接近凝胶2/3的位置处中止。
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④ 凝胶浸没在7% 三氯醋酸 (TCA)中,室温30min。
⑤ 干胶器上真空干燥凝胶,或玻璃板加压的多层纸巾下干燥1-2 hours。
⑥ 干燥的凝胶覆盖在塑料封皮下,室温X-ray胶片室温暴光过夜。
对照的合成
提供带3’-poly(A)尾的1.1 kb RNA 作为对照。
① 冰上在一个管子中制备如下反应混合物:
模板RNA*:
对照 RNA 0.5μg
引物:
oligo(dT)18引物(0.5μg/μl) 1μl
或随机六聚物引物(0.2μg/μl) 1μl
或对照(序列特异性)引物(10pmol) 2μl
DEPC处理过的水 to 11μl
轻柔混合,微量离心机离心3-5秒。
② 70°C孵育混合物5min,冰冷却,短暂离心,收集沉淀。
③ 管子置于冰上,按指定顺序加入以下成份:
5x 反应缓冲液 4μl
10mM dNTP 混合物 2μl
RiboLock?核糖核酸酶抑制剂(20u/μl) 1μl
轻柔混合,短暂离心,收集沉淀。
④ 37°C孵育5min(随机六聚物引物25°C 5min)。
⑤ 加入:
[?-32P]dATP (10mCi/ml) 1μl
RevertAid? M-MuLV 逆转录酶 (200u/μl) 1μl
终体积20μl。
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⑥ 42°C孵育混合物60min (随机六聚物引物25°C孵育10min,最后42°C 60min)。
⑦ 加入1μl 0.5M EDTA终止反应,置于冰上。
⑧ 分析产物(see chapter 4)。
注意:
1. 使用对照RNA时第一链cDNA的得率常大于50%。
2. 如果用oligo(dT)18或对照(序列特异性)引物合成对照– 可以观察到一个清楚的1.1 kb 条带。如果用随机六聚物引物,通常可观察到几个短的条带。
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常见问题
低得率、没有可检测到的产物是逆转录酶反应失败的两个清楚标志。
可能原因 检查 补救
DNA模板降解。 用乙二醛、甲醛凝胶电泳检查RNA模板完整性。对照RNA在凝胶中应该可见一条明亮的1.1kb带。 操作样品RNA时,要小心不要被RNases污染。-70°C保存模板RNA和对照RNA,避免避免反复冻融样品,融化后置于冰上。
RNase污染反应 混合物。 使用对照并分析所得产物(见对照的合成)。 无菌状态下制备反应混合物,始终戴手套,用DEPC 处理所有接触样品的器皿。主要不要污染溶液。
RevertAid? M-MuLV逆转录酶抑制剂(SDS, EDTA, 胍盐, 磷酸盐, 焦磷酸盐, 多胺, 精胺, 精脒)。 在RNA样品中混入1μg对照RNA,同时合成。如果用oligo(dT)18或对照引物,合成的得率应该大于50%,可见到一明亮的1.1kb附加条带。 96%乙醇沉淀RNA样品,75%乙醇洗涤 (制备乙醇溶液应使用DEPC处理过的水). 不要加抑制剂到反应混合物中。
不适当的引物 用其他的引物进行,分析产物。 序列特异性引物应该与RNA 3’-末端互补。如果If the RNA模板包含转录间歇,使用随机六聚物引物合成。
合成的第一链cDNA序列错误。 重复合成cDNA。
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质量控制
试剂盒的所有试剂都通过用一个多腺苷酸RNA转录本作为对照模板(特异的对照引物、oligo(dT)18、随机六聚物引物)进行第一链cDNA合成反应来检测。.
质量核定: Birute Gagiliene
核酸提取试剂中的洗脱液的作用
乙酸乙酯能在水溶液中萃取tritonx-114,使蛋白留在水溶液中么
乙酸乙酯能在水溶液中萃取tritonx-114,使蛋白留在水溶液中
乙酸乙酯是无色透明液体,低毒性,有甜味,浓度较高时有 *** 性气味,易挥发,对空气敏感,能吸水分,使其缓慢水解而呈酸性反应。能与氯仿、乙醇、丙酮和乙醚混溶,溶于水(10%ml/ml)。能溶解某些金属盐类(如氯化锂、氯化钴、氯化锌、氯化铁等)反应。相对密度0.902。熔点-83℃。沸点77℃。折光率1.3719。闪点7.2℃(开杯)。易燃。蒸气能与空气形成爆炸性混合物。半数致死量(大鼠,经口)11.3ml/kg。
15ML乙酸乙酯与15ML含乙酸的水溶液互溶,摇荡分液后,乙酸大部分在哪?测下ph值
哪个低哪个含的就多呗
应该是在水中多一些吧
现有1,乙酸乙酯和乙酸钠溶液、2溴化钠溶液和溴水溶液,分离他们的正确方法是1 加水 分液 上层乙酸乙酯 下层乙酸钠
2 加四氯化碳 分液 上层 溴化钠 下层 溴水
乙酸钠水溶液和乙酸钠溶液一样么一样的,说溶液一般预设是水溶液,如果是其他溶剂必须说明是乙酸钠的什么什么溶液
萃取乙醇水溶液时,选择什么萃取剂不能萃取。
乙醇与 水任意比例混溶,在水中溶解度达到了极限,没有有机试剂的溶解度大于这个值。因此不能使用萃取法。
应该用蒸馏法。加热生石灰,然后蒸馏,能提纯乙醇。
怎样用实验鉴别乙醇、乙酸、乙酸乙酯、葡萄糖四种物质的水溶液?
1.分别加水,不溶于水的是乙酸乙酯.
2.剩余3种溶液加入紫色石蕊试剂,变红的是乙酸.
3.再剩余的两种溶液,能发生银镜反应的是葡萄糖,最后剩下的是乙醇.
如何用实验鉴别乙醇、乙酸、乙酸乙酯、葡萄糖四种物质的水溶液?首先各取少量以上水溶液,与硝酸银反应,有银镜产生的是葡萄糖
再加入小苏打,可以有气体生成的是乙酸
再加入金属钠,可以反应生成氢的是乙醇
最后一个是乙酸乙酯
乙酸乙酯溶于水?乙酸乙酯与乙酸钠溶液用分液的能分开吗?乙酸乙酯不溶于水。可以分开。有个实验用乙醇和乙酸制取乙酸乙酯,最后使用氢氧化钠的水溶液来收集的,所以是可以的、。。
常温下只用水难以鉴别的是 A 乙酸甲苯硝基苯 B苯苯酚水溶液酒精水溶液 C乙醛乙酸乙酯溴苯 D淀粉蔗糖石蕊选BD
A 乙酸---互溶,不分层
甲苯----不溶,分层,油层在上层
硝基苯 ---不溶,分层,油层在下层
B苯---不溶,分层,油层在上层
苯酚水溶液-------互溶,不分层
酒精水溶液 ---互溶,不分层
C乙醛-------互溶,不分层
乙酸乙酯----不溶,分层,油层在上层
溴苯 ----不溶,分层,油层在下层
D淀粉------溶,不分层
蔗糖------溶,不分层
石蕊------溶,不分层,但有颜色(紫色)
乙酸乙酯在水中不溶,为什么加入饱和碳酸钠溶液会降低乙酸乙酯在水中乙酸乙酯微溶于水中,由于饱和碳酸钠溶液会增大水的极性,乙酸乙酯在水中的溶解度就更小
チオシアン酸カリウム中文翻译
核酸提取试剂中的洗脱液的作用是固液分离。收集清液。即为核酸。根据核酸试剂中心文件显示。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物。为生命的最基本物质之一。洗脱液、吸附物和待提取样品混合并反应。得到吸附有核酸的所述吸附物。所述洗脱液包括:20mmol/l~200mmol/l的nacl、10mmol/l~50mmol/l的tris、10mmol/l~50mmol/l的edta、质量百分含量为0.1%~0.5%的十二烷基硫酸钠、质量百分含量为2%~4%的tritonx-100、0.5mol/l~1mol/l的nabro3及0.5mol/l~1mol/l的异硫氰酸胍。及采用洗脱液处理吸附有核酸的吸附物。固液分离并收集清液。得到核酸。
チオシアン酸カリウム 溶液(1.6?10M)は市贩特级试薬を水に溶解した。硫氰酸钾溶液(1.6~10M)用市售特级试剂溶于水中配制。
発色试薬として チオシアン酸カリウム 溶液(6M)2ml,塩化鉄(III)溶液(8mM)2mlをフィルター上に添加し,约1分间放置した後,吸引する。
硫氰酸钾溶液(6M)2ml、氯化铁(III)溶液(8mM)2ml作为显色试剂加到滤膜上,放置约1分钟后进行抽滤。
チオシアン酸カリウム (1.6M)?塩化鉄(6mM)混合溶液は,チオシアン酸カリウム溶液(10M)8mlと塩化鉄(III)溶液(0.1M)3mlを混合し,水で希釈して50mlとした。
硫氰酸钾(1.6M)-氯化铁(6mM)的混合溶液,是通过将硫氰酸钾溶液(10M)8ml和氯化铁(III)溶液(0.1M)3ml混合,用水稀释至50ml配制。
チオシアン酸カリウム(1.6M)?塩化鉄(6mM)混合溶液は, チオシアン酸カリウム 溶液(10M)8mlと塩化鉄(III)溶液(0.1M)3mlを混合し,水で希釈して50mlとした。
硫氰酸钾(1.6M)-氯化铁(6mM)的混合溶液,是通过将硫氰酸钾溶液(10M)8ml和氯化铁(III)溶液(0.1M)3ml混合,用水稀释至50ml配制。
方法 酸性(pH≦0.5)条件で、NaFeEDTA中の鉄は完全にFe ̄(3+)に解离し、Triton X―100を溶媒として、ミセルの条件で、Fe ̄(3+)は チオシアン酸カリウム と反応し、赤い错体を生成し、最大な吸収波长λmax=490nmで测定した。
方法在酸性(pH≤0.5)条件下,NaFeEDTA中的铁完全解离成游离的Fe ̄(3+),以Triton X―100作增溶剂,在胶束条件下,Fe ̄(3+)与显色剂硫氰酸钾反应生成红色配合物,在最大吸收波长λmax=490nm处测定。
好了,今天关于试剂triton中文就到这里了。希望大家对试剂triton中文有更深入的了解,同时也希望这个话题试剂triton中文的解答可以帮助到大家。
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